定量测试定律俗称朗伯-比尔定律，其成立条件是待测物为均一的稀溶液、气体等，无溶质、溶剂及悬浊物引起的散射；入射光为单色平行光。那么引起朗伯-比尔定律不成立的也基本是上述原因所致。
1、高浓度引起的朗伯-比尔定律的不成立
当吸收物质浓度很高时，吸收质点距离很近，会互相影响对方的电荷分布，使吸收质点对某一特定波长光的吸收能力改变，从而引起定律不成立。在有些情况下当浓度很大时，会引起折射率的变化，也会是定律不成立。同样在溶液浓度很高时，质点距离很近，会引起辐射和吸收的重叠，从而降低整体的吸收能力，使定律不成立。
2、非单色光引起朗伯-比尔定律的不成立
就目前国内外分光光度计制造而言，不可能制造出能够分出单色光的光度计，由单色器分光后的光并非纯粹的锐线光，而是有一定宽度的光谱。光经过样品后，非特定波长的光被吸收的很少，进入检测器，由光信号转为电信号，得出数据，如果仪器的光谱带宽过大会使定律不成立。
3、杂散光过大引起朗伯-比尔定律的不成立
在测试低浓度样品时，看不出杂光对结果的影响，但是当测试高浓度样品时，杂光对测试结果的影响就很大了。例如：当测试有一定浓度的样品时，其透过率为：3%，若仪器的杂散光是：0.5%，无疑这对数据结果影响是很大的。所以杂散光过大会使定律不成立。
4、悬浊液和混浊液使朗伯-比尔定律不成立
因为质点在测试容器中会不停的运动，因为悬浊液或混浊液的质点体积比较大，会直接影响测试结果的不稳定，当质点运动到光射的位置会使透过率变小、吸光度变大，无法读出一个准确的值，自然使定律不成立。
5、非平行光使定律不成立
目前国内外仪器所采用的光源都是发散式的，需经过透镜或凹面镜聚焦，绝大部分仪器经过样品池时都不是平行的，这样会引起光的复杂变化，使读数不准确，定律不成立。
其它还有很多因素会使定律不成立，如：胶态溶液、光度精度和散射的影响等，在此仅提供以上主要因素引起的定律不成立的简单介绍，仅供参考。
更新时间：2010-04-26
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