双光束紫外可见分光光度计是一种常用的实验室仪器,用于测量物质在紫外和可见光范围内对光的吸收和透射性质。它基于分光技术和光电检测技术,能够准确地测量样品溶液或气体的吸收光谱,并提供丰富的光学参数。其原理基于比较法和比色法。
比较法:分光光度计使用的是双光束设计。它将参考光与样品光同时照射在检测器上。检测器通过光电效应将光信号转化为电信号,并将两个信号进行比较。当样品溶液对某个特定波长的光吸收较少时,参考光和样品光的强度差异很小,电信号也相近。当样品溶液对这个波长的光吸收增加时,样品光的强度减弱,从而导致参考光和样品光之间的强度差异增大,电信号也相应增大。
比色法:双光束紫外可见分光光度计也可以采用比色法测量。在该方法中,使用一个底物试剂或标准物质,并针对特定反应选择一个适当的波长。当底物试剂与样品发生化学反应时,会产生染色反应,并在特定波长下吸收光线。通过测量吸光度的变化,可以确定样品的浓度或反应的程度。
双光束紫外可见分光光度计的光学系统由光源、单色器、光束分离器和探测器组成。光源产生宽带光源(通常包含紫外和可见光),单色器根据需要选择特定波长的光线,光束分离器将光线分成参考光和样品光,光电二极管探测器负责测量光的强度。通过检测器获得的光信号转化为电信号后,通过一系列的电路处理和转换,可以得到吸光度(Absorbance)或透光度(Transmittance)值。可以利用这些数值制作吸收光谱图、透射光谱图或浓度-吸光度曲线等。进一步的数据分析包括峰值寻找、吸收峰面积计算和浓度计算等。